In vitro Survival and Growth of Salmonella Typhimurium inoculated on Yolk Membrane after long Term refrigerated Storage of Shell Eggs

Abstract.

Salmonella enterica serovar Typhimurium has been isolated from commercial egg production facilities in the United States. Given its importance as a causative organism for food-borne salmonellosis, identifying approximate timelines for bacterial invasion of the egg is needed. The objective of this study was to examine net growth of S. Typhimurium in egg components over time. In trial 1 eggs were collected over a 24 hour period from a flock of single comb white leghorn hens while in trial 2 eggs were picked up from a commercial laying source once a week over the course of eight weeks and stored. Eggs were held at refrigeration temperature and each week, subsets of eggs were cracked, separated into yolk and albumen components, and inoculated with 10⁸ CFU/ml of novobiocin and nalidixic acid (NO/NA) resistant S. Typhimurium onto the vitelline membrane of the egg. Yolks were then covered with albumen. Eggs were incubated for twenty-four hours at 25°C. After incubation eggs were again separated into albumen, yolk, and vitelline membrane samples. In trial 1, S. Typhimurium net growth occurred in albumen by the second week and continued from 4 to 8 weeks while in trial 2 net growth only occurred at week 5 and 7. S. Typhimurium net growth on vitelline membranes occurred by 2 weeks and continued from 4 to 8 weeks in trial 1 while no net growth occurred in trial 2 over the 8 week period. Yolk samples showed no net increases in S. Typhimurium populations over the 8 week period.

Zusammenfassung (Redaktion).

Salmonella enterica serovar Typhimurium ist aus Hühnereiern isoliert worden, die in den USA für den Verkauf vorgesehen waren. In Kenntnis, dass dieses Bakterium lebensmittelabhängig humanpathogen sein kann, ist es von Interesse, den zeitlichen Verlauf der bakteriellen Besiedlung von Eiern zu untersuchen. Ziel der vorliegenden Studie war es daher, das Wachstum von S. Typhimurium in den Ei-Komponenten in Abhängigkeit von der Zeit zu untersuchen. Im 1. Versuchsansatz wurden die Eier einer Schar Leghorn-Hennen im Zeitraum von 24 Stunden gesammelt, während im 2. Versuchsansatz einmal wöchentlich im Handel angebotene Eier in einem Zeitraum von 8 Wochen erworben wurden. Die Eier wurden im Kühlschrank aufbewahrt. Einmal wöchentlich wurden Eier entnommen und geöffnet; das Eiweiß wurde vom Dotter getrennt; die den Dotter umhüllende Haut wurde mit 10⁸ CFU/ml einer Novobiocin- und Nalidixinsäure-resistenten S. Typhimurium-Kultur beimpft. Die beimpften Dotter wurden mit dem Eiweiß bedeckt und bei 25°C 24 Stunden lang inkubiert. Anschließend wurden Proben genommen vom Eiweiß, Dotter und der ihn umhüllenden Haut. Beim Versuchsansatz 1 begann das Wachstum von S. Typhimurium im Eiweiß in der 2. Woche und setzte sich in der 4. bis 8. Woche fort; beim Versuchsansatz 2 dagegen war das Wachstum von S. Typhimurium im Eiweiß nur in der 5. und der 7. Woche zu verzeichnen. Auf der Dotter-umhüllenden Haut war beim Versuchsansatz 1 Wachstum nach 2 Wochen und danach im Zeitraum der 4. bis 8. Woche nachzuweisen, beim Versuchsansatz 2 nur in der 5. und 7. Woche. Der Eidotter wies während der 8 Wochen kein Wachstum von S. Typhimurium auf.